1.項目背景
1.1 D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化因子ⅩⅢ交聯(lián)后，經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異性降解產(chǎn)物，能夠反映體內的凝血功能和纖溶活性，是機體高凝狀態(tài)、血栓形成、繼發(fā)性纖溶亢進的指標。在深靜脈血栓、肺栓塞、彌散性血管內凝血、重癥肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓治療后均可見D-二聚體水平升高，可作為溶栓治療的有效觀察指標。由于具有極高的敏感性和陰性預測值，臨床上已經(jīng)將D-二聚體陰性作為排除肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深靜脈血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依據(jù)。
1.2 目前D-二聚體檢測方法眾多，主要有酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）、酶聯(lián)免疫熒光（ELFA）、非增強膠乳凝集試驗、膠乳增強免疫比濁法、化學發(fā)光法、免疫層析（POCT）等。這些方法在檢測方便性、檢測時長、檢測敏感性、結果報告（定性/半定量/定量）等方面各有不同。由于針對 D-二聚體D-結構域單克隆抗體的引入，使得檢測特異性和敏感性獲得了顯著的提高，但不同檢測方法間結果差異可達幾十倍，特別是檢測敏感性（陰性排除價值），大多數(shù)未獲得驗證或權威機構認可。
1.3 在2022年《急診胸痛心血管標志物聯(lián)合檢測專家共識》中，推薦意見 12 ：基于D-二聚體檢測缺乏國際認證的內部對照或校準品，不同實驗室結果不具可比性，建議在動態(tài)監(jiān)測時采用同一方法。【推薦級別：強推薦】
2.性能表現(xiàn)
針對D-二聚體的檢測，西寶生物推出2種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下。
2.1化學發(fā)光（AP）平臺：
2.1.1組合1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.1.2組合2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.2化學發(fā)光（AE）平臺：
2.2.1組合3：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記吖啶酯；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.2.2組合4：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記吖啶酯；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：
組合5：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）劃膜；
線性范圍：0.1mg/L-15mg/L。
濃度值在660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
3. 臨床相關性
3.1 化學發(fā)光（AP）平臺：
3.1.1 組合1
西寶DD抗體配對組合1（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;
西寶DD抗體配對組合1（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
3.1.2 組合2
西寶DD抗體配對組合2（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.94左右;
西寶DD抗體配對組合2（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2大于0.95。
3.2化學發(fā)光（AE）平臺：
3.2.1 組合3
西寶DD抗體配對組合3（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95;
西寶DD抗體配對組合3（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
3.2.2 組合4
西寶DD抗體配對組合4（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;
西寶DD抗體配對組合4（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
3.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：
西寶DD抗體配對組合5（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;
西寶DD抗體配對組合5（＜15mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
4. 測試方案
4.1化學發(fā)光（AP）平臺：
4.1.1 組合1
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入底物，進行測試。
4.1.2 組合2
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入底物，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器: 迎凱Shine i2900。
4.2化學發(fā)光（AE）平臺：
4.2.1 組合3
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
4.2.2 組合4
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器: 科斯邁SMART 500S。
4.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺 組合5：
待測抗原：D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品:加樣量5ul；
反應條件： 樣本+熒光液混勻，上樣，反應時間（10min-15min）；
測試使用熒光儀器: 和邁FIC-S100；
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 推薦配對 |
D-二聚體（D-Dimer）抗體 | EKY0088M | D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記堿性磷酸酶 （發(fā)光配對組合1） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）標記堿性磷酸酶 （發(fā)光配對組合2） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記吖啶酯 （發(fā)光配對組合3） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）標記吖啶酯 （發(fā)光配對組合4） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）劃膜 （熒光配對組合） |
D-二聚體（D-Dimer）抗體 | EKY0088N | |
D-二聚體（D-Dimer）抗原（天然） | EKN0230D | 校準、質控 |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1330A | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1330B | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1330C | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1330D | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-吖啶酯濃縮液 | DKY1330E | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-吖啶酯濃縮液 | DKY1330F | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球濃縮液 | DKY1330G | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517A | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B- | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
時間分辨熒光微球，羧基（200nm） | AEG0786B |
部分圖片來源于網(wǎng)絡
1.項目背景
1.1 D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化因子ⅩⅢ交聯(lián)后，經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異性降解產(chǎn)物，能夠反映體內的凝血功能和纖溶活性，是機體高凝狀態(tài)、血栓形成、繼發(fā)性纖溶亢進的指標。在深靜脈血栓、肺栓塞、彌散性血管內凝血、重癥肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓治療后均可見D-二聚體水平升高，可作為溶栓治療的有效觀察指標。由于具有極高的敏感性和陰性預測值，臨床上已經(jīng)將D-二聚體陰性作為排除肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深靜脈血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依據(jù)。
1.2 目前D-二聚體檢測方法眾多，主要有酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）、酶聯(lián)免疫熒光（ELFA）、非增強膠乳凝集試驗、膠乳增強免疫比濁法、化學發(fā)光法、免疫層析（POCT）等。這些方法在檢測方便性、檢測時長、檢測敏感性、結果報告（定性/半定量/定量）等方面各有不同。由于針對 D-二聚體D-結構域單克隆抗體的引入，使得檢測特異性和敏感性獲得了顯著的提高，但不同檢測方法間結果差異可達幾十倍，特別是檢測敏感性（陰性排除價值），大多數(shù)未獲得驗證或權威機構認可。
1.3 在2022年《急診胸痛心血管標志物聯(lián)合檢測專家共識》中，推薦意見 12 ：基于D-二聚體檢測缺乏國際認證的內部對照或校準品，不同實驗室結果不具可比性，建議在動態(tài)監(jiān)測時采用同一方法。【推薦級別：強推薦】
2.性能表現(xiàn)
針對D-二聚體的檢測，西寶生物推出2種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下。
2.1化學發(fā)光（AP）平臺：
2.1.1組合1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.1.2組合2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.2化學發(fā)光（AE）平臺：
2.2.1組合3：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記吖啶酯；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.2.2組合4：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記吖啶酯；
線性范圍：0.05mg/L-40mg/L；最低檢出限：0.05mg/L；
濃度值在1660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
2.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：
組合5：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球+D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）劃膜；
線性范圍：0.1mg/L-15mg/L。
濃度值在660 mg/L以內沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(HOOK效應)。
3. 臨床相關性
3.1 化學發(fā)光（AP）平臺：
3.1.1 組合1
西寶DD抗體配對組合1（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;
西寶DD抗體配對組合1（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
3.1.2 組合2
西寶DD抗體配對組合2（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.94左右;
西寶DD抗體配對組合2（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2大于0.95。
3.2化學發(fā)光（AE）平臺：
3.2.1 組合3
西寶DD抗體配對組合3（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95;
西寶DD抗體配對組合3（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
3.2.2 組合4
西寶DD抗體配對組合4（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;
西寶DD抗體配對組合4（＜40mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
3.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺：
西寶DD抗體配對組合5（＜4mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2在0.95左右;
西寶DD抗體配對組合5（＜15mg/L）的發(fā)光值與希森美康DD試劑臨床相關性R2＞0.95。
4. 測試方案
4.1化學發(fā)光（AP）平臺：
4.1.1 組合1
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入底物，進行測試。
4.1.2 組合2
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入底物，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器: 迎凱Shine i2900。
4.2化學發(fā)光（AE）平臺：
4.2.1 組合3
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
4.2.2 組合4
待測抗原: D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品（需要預稀釋）:加樣量20ul；
試劑1： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2： D-二聚體（D-Dimer）單克隆抗體（貨號：EKY0088M）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步： 20ul預稀釋樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步： 加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器: 科斯邁SMART 500S。
4.3熒光免疫層析（鑭系元素Eu螯合物填充）平臺 組合5：
待測抗原：D-二聚體（D-Dimer）抗原（貨號：EKN0230D）,樣本/標準品:加樣量5ul；
反應條件： 樣本+熒光液混勻，上樣，反應時間（10min-15min）；
測試使用熒光儀器: 和邁FIC-S100；
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 推薦配對 |
D-二聚體（D-Dimer）抗體 | EKY0088M | D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記堿性磷酸酶 （發(fā)光配對組合1） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）標記堿性磷酸酶 （發(fā)光配對組合2） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記吖啶酯 （發(fā)光配對組合3） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）包被羧基磁珠+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）標記吖啶酯 （發(fā)光配對組合4） D-二聚體抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球+D-二聚體抗體（貨號：EKY0088M）劃膜 （熒光配對組合） |
D-二聚體（D-Dimer）抗體 | EKY0088N | |
D-二聚體（D-Dimer）抗原（天然） | EKN0230D | 校準、質控 |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1330A | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1330B | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1330C | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1330D | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088M）-吖啶酯濃縮液 | DKY1330E | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）-吖啶酯濃縮液 | DKY1330F | |
D-二聚體（D-Dimer）抗體（貨號：EKY0088N）標記熒光微球濃縮液 | DKY1330G | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517A | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B- | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
時間分辨熒光微球，羧基（200nm） | AEG0786B |
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