1.項(xiàng)目背景
1.1呼吸道合胞病毒（RSV）背景介紹
呼吸道合胞病毒（RSV）會(huì)引起肺部和呼吸道感染。這種病毒很普遍，大多數(shù)兒童在 2 歲前就感染過這種病毒。呼吸道合胞體病毒也可感染成人。在成人和老年人以及健康的兒童中，呼吸道合胞病毒 的癥狀較輕，通常與普通感冒相似。通常只需要采取自我護(hù)理措施便可以緩解任何不適。呼吸道合胞病毒 可導(dǎo)致一些人群出現(xiàn)嚴(yán)重感染，包括 12 個(gè)月及更小的寶寶（嬰兒，特別是早產(chǎn)兒）、老年人、心肺疾病患者或任何免疫系統(tǒng)脆弱（免疫受損）的人群。
1.2什么是RSV
相對(duì)于流感、新冠來說，大家對(duì)RSV的關(guān)注顯得微不足道，但對(duì)于嬰兒和老年人來說，RSV病毒可能是致命的。根據(jù)美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心的數(shù)據(jù)，在美國(guó)RSV病毒每年導(dǎo)致5.8萬例5歲以下的兒童和17.7萬例65歲及以上的老年人住院，其中，1.3萬例老年人死亡。
呼吸道合胞病毒（RSV）屬于副黏病毒科、肺病毒屬的單股、負(fù)鏈RNA病毒。根據(jù)基因組序列RSV分為A、B兩種亞型，兩種亞型的毒株可同時(shí)引起傳播感染，但一般只有一種亞型的毒株占主導(dǎo)地位。RSV是一種包膜病毒，RSV病毒顆粒直徑100-300nm，基因組長(zhǎng)約15.2kb，包含10個(gè)基因，編碼11種蛋白質(zhì)。其中兩個(gè)跨膜蛋白G蛋白和F蛋白是病毒的兩個(gè)主要保護(hù)性抗原。
圖1 RSVRNA基因組（圖源:來自網(wǎng)絡(luò)）
融合蛋白（Fusion protein, F）被宿主蛋白酶切割成F1和F2兩個(gè)片段后才具有活性，能引起病毒囊膜與宿主細(xì)胞膜融合，在RSV感染引發(fā)的免疫病理中起作用，是目前抗體、疫苗及其他治療性藥物研發(fā)的熱點(diǎn)蛋白。
表面黏附糖蛋白（Attachment glycoprotein, G）主要負(fù)責(zé)對(duì)宿主細(xì)胞的附著，使RSV吸附于宿主細(xì)胞上導(dǎo)致感染開始。G蛋白在不同菌株間存在差異，保守性不如F蛋白高。核衣殼蛋白（Nucleoprotein, N）包裹病毒基因組，形成核蛋白復(fù)合體。
RSV相關(guān)蛋白、抗體等試劑在疫苗開發(fā)、藥物開發(fā)以及診斷試劑開發(fā)中的應(yīng)用。
1.3在診斷試劑開發(fā)中的應(yīng)用
RSV是免疫缺陷人群及嬰幼兒嚴(yán)重呼吸道疾病的主要致病因子，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都很高。早期和準(zhǔn)確的診斷RSV對(duì)合適的治療至關(guān)重要。
RSV抗原檢測(cè)方法常用的有ELISA和免疫熒光法，而基于切向流技術(shù)的RSV抗原檢測(cè)具有便攜、快速、可實(shí)現(xiàn)床旁檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，RSV檢測(cè)方法的靈敏度和特異性也在不斷提高。而抗原、抗體是免疫學(xué)檢測(cè)試劑的主要生物活性組分，直接影響檢測(cè)結(jié)果的特異性和靈敏度。
1.4 RSV傳統(tǒng)的檢測(cè)方法
ELISA法和免疫熒光法是傳統(tǒng)的RSV檢測(cè)方法。一種低成本的改良ELISA方法已經(jīng)被開發(fā)出來，其檢測(cè)RSV 的F蛋白，可以在25分鐘內(nèi)檢測(cè)出RSV。免疫熒光法可以使用熒光標(biāo)記的一抗或二抗快速檢測(cè)RSV抗原。例如，直接熒光抗體法(direct fluorescent antibody assay, DFA)要求標(biāo)本中有一定數(shù)量的細(xì)胞，其靈敏度和特異度分別為94%和96.8%，因其簡(jiǎn)便、快速而被臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛用于RSV的檢測(cè)。
另一種快速RSV檢測(cè)方法是：基于免疫層析技術(shù)的側(cè)流免疫分析法(Lateral flow immunoassay，LFIA，使用的是鼻腔洗液或分泌物樣本。目前市場(chǎng)上有許多LFIA試劑盒，如BD Directigen EZ RSV、Binax now RSV、RSV Respi-Strip、Remel Xpect、QuickLab RSV test等。
還有一種就是RCR檢測(cè)方法：PCR方法以巢式RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，利用RSV-A或-B的F基因設(shè)計(jì)外引物和內(nèi)引物。該方法已在成人感染的診斷中得到應(yīng)用。它可以用于檢測(cè)低病毒滴度的樣品，并敏感地鑒定使用基于抗原的檢測(cè)方法。
西寶生物開發(fā)的高質(zhì)量RSV N重組蛋白和RSV F重組蛋白，可應(yīng)用于RSV抗原檢測(cè)試劑核心原料（抗體對(duì)）的制備和篩選，也可做為抗原檢測(cè)試劑的質(zhì)控品。西寶生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)還篩選出優(yōu)質(zhì)的配對(duì)抗體為RSV抗原檢測(cè)試劑盒開發(fā)者保駕護(hù)航。
2.測(cè)試方案及性能表現(xiàn)
2.1膠體金免疫層析平臺(tái)：
2.1.1抗體配對(duì)組合：呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）標(biāo)記膠體金（噴在釋放墊上）+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）劃膜；
2.1.2 呼吸道（RSV）合胞病毒抗原（貨號(hào)：EKY0217B）用合適的稀釋液依次稀釋到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL。
2.1.3反應(yīng)模式：10uL樣品+90uL稀釋液混勻，取80uL混合液上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；
2.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在膠體金免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合測(cè)試呼吸道（RSV）合胞病毒抗原稀釋梯度均顯色，測(cè)試三例陰性樣品均不顯色，靈敏度可達(dá)5ng/mL，表明此抗體配對(duì)在膠體金層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。
膠體金層析平臺(tái)測(cè)試示意圖
2.2彩色乳膠免疫層析平臺(tái)：
2.2.1抗體配對(duì)組合：呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）標(biāo)記彩色乳膠（噴在釋放墊上）+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）劃膜劃膜；
2.2.2 呼吸道（RSV）合胞病毒抗原（貨號(hào)：EKY0217B）用合適的稀釋液依次稀釋到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。
2.2.3反應(yīng)模式：10uL樣品+90uL稀釋液混勻，取80uL混合液上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；
2.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在彩色乳膠免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合測(cè)試呼吸道（RSV）合胞病毒抗原稀釋梯度均顯色，測(cè)試三例陰性樣品均不顯色，靈敏度可達(dá)0.2ng/mL，表明此抗體配對(duì)在彩色乳膠免疫層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。
彩色乳膠層析平臺(tái)測(cè)試示意圖
3.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 推薦配對(duì) |
人呼吸道合胞病毒（RSV）抗體 | EKY0828A | 呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）標(biāo)記膠體金+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）劃膜（膠體金層析配對(duì)組合） 呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）標(biāo)記彩色乳膠+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）劃膜（彩色乳膠層析配對(duì)組合） |
人呼吸道合胞病毒（RSV）抗體 | EKY0828B | |
呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）-膠體金濃縮液 | DKY1325A | |
呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）-彩色乳膠濃縮液 | DKY1325B | |
膠體金（40nm，1OD） | DXJ9917B-100ml | |
紅色羧基乳膠微球，400nm | DEG0809A-10ml | |
呼吸道（RSV）合胞病毒抗原 | EKY0217B |
1.項(xiàng)目背景
1.1呼吸道合胞病毒（RSV）背景介紹
呼吸道合胞病毒（RSV）會(huì)引起肺部和呼吸道感染。這種病毒很普遍，大多數(shù)兒童在 2 歲前就感染過這種病毒。呼吸道合胞體病毒也可感染成人。在成人和老年人以及健康的兒童中，呼吸道合胞病毒 的癥狀較輕，通常與普通感冒相似。通常只需要采取自我護(hù)理措施便可以緩解任何不適。呼吸道合胞病毒 可導(dǎo)致一些人群出現(xiàn)嚴(yán)重感染，包括 12 個(gè)月及更小的寶寶（嬰兒，特別是早產(chǎn)兒）、老年人、心肺疾病患者或任何免疫系統(tǒng)脆弱（免疫受損）的人群。
1.2什么是RSV
相對(duì)于流感、新冠來說，大家對(duì)RSV的關(guān)注顯得微不足道，但對(duì)于嬰兒和老年人來說，RSV病毒可能是致命的。根據(jù)美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心的數(shù)據(jù)，在美國(guó)RSV病毒每年導(dǎo)致5.8萬例5歲以下的兒童和17.7萬例65歲及以上的老年人住院，其中，1.3萬例老年人死亡。呼吸道合胞病毒（RSV）屬于副黏病毒科、肺病毒屬的單股、負(fù)鏈RNA病毒。根據(jù)基因組序列RSV分為A、B兩種亞型，兩種亞型的毒株可同時(shí)引起傳播感染，但一般只有一種亞型的毒株占主導(dǎo)地位。RSV是一種包膜病毒，RSV病毒顆粒直徑100-300nm，基因組長(zhǎng)約15.2kb，包含10個(gè)基因，編碼11種蛋白質(zhì)。其中兩個(gè)跨膜蛋白G蛋白和F蛋白是病毒的兩個(gè)主要保護(hù)性抗原。
圖1 RSVRNA基因組（圖源:來自網(wǎng)絡(luò)）
融合蛋白（Fusion protein, F）被宿主蛋白酶切割成F1和F2兩個(gè)片段后才具有活性，能引起病毒囊膜與宿主細(xì)胞膜融合，在RSV感染引發(fā)的免疫病理中起作用，是目前抗體、疫苗及其他治療性藥物研發(fā)的熱點(diǎn)蛋白。
表面黏附糖蛋白（Attachment glycoprotein, G）主要負(fù)責(zé)對(duì)宿主細(xì)胞的附著，使RSV吸附于宿主細(xì)胞上導(dǎo)致感染開始。G蛋白在不同菌株間存在差異，保守性不如F蛋白高。核衣殼蛋白（Nucleoprotein, N）包裹病毒基因組，形成核蛋白復(fù)合體。
RSV相關(guān)蛋白、抗體等試劑在疫苗開發(fā)、藥物開發(fā)以及診斷試劑開發(fā)中的應(yīng)用。
1.3在診斷試劑開發(fā)中的應(yīng)用
RSV是免疫缺陷人群及嬰幼兒嚴(yán)重呼吸道疾病的主要致病因子，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都很高。早期和準(zhǔn)確的診斷RSV對(duì)合適的治療至關(guān)重要。
RSV抗原檢測(cè)方法常用的有ELISA和免疫熒光法，而基于切向流技術(shù)的RSV抗原檢測(cè)具有便攜、快速、可實(shí)現(xiàn)床旁檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，RSV檢測(cè)方法的靈敏度和特異性也在不斷提高。而抗原、抗體是免疫學(xué)檢測(cè)試劑的主要生物活性組分，直接影響檢測(cè)結(jié)果的特異性和靈敏度。
1.4 RSV傳統(tǒng)的檢測(cè)方法
ELISA法和免疫熒光法是傳統(tǒng)的RSV檢測(cè)方法。一種低成本的改良ELISA方法已經(jīng)被開發(fā)出來，其檢測(cè)RSV 的F蛋白，可以在25分鐘內(nèi)檢測(cè)出RSV。免疫熒光法可以使用熒光標(biāo)記的一抗或二抗快速檢測(cè)RSV抗原。例如，直接熒光抗體法(direct fluorescent antibody assay, DFA)要求標(biāo)本中有一定數(shù)量的細(xì)胞，其靈敏度和特異度分別為94%和96.8%，因其簡(jiǎn)便、快速而被臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛用于RSV的檢測(cè)。
另一種快速RSV檢測(cè)方法是：基于免疫層析技術(shù)的側(cè)流免疫分析法(Lateral flow immunoassay，LFIA，使用的是鼻腔洗液或分泌物樣本。目前市場(chǎng)上有許多LFIA試劑盒，如BD Directigen EZ RSV、Binax now RSV、RSV Respi-Strip、Remel Xpect、QuickLab RSV test等。
還有一種就是RCR檢測(cè)方法：PCR方法以巢式RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，利用RSV-A或-B的F基因設(shè)計(jì)外引物和內(nèi)引物。該方法已在成人感染的診斷中得到應(yīng)用。它可以用于檢測(cè)低病毒滴度的樣品，并敏感地鑒定使用基于抗原的檢測(cè)方法。
西寶生物開發(fā)的高質(zhì)量RSV N重組蛋白和RSV F重組蛋白，可應(yīng)用于RSV抗原檢測(cè)試劑核心原料（抗體對(duì)）的制備和篩選，也可做為抗原檢測(cè)試劑的質(zhì)控品。西寶生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)還篩選出優(yōu)質(zhì)的配對(duì)抗體為RSV抗原檢測(cè)試劑盒開發(fā)者保駕護(hù)航。
2.測(cè)試方案及性能表現(xiàn)
2.1膠體金免疫層析平臺(tái)：
2.1.1抗體配對(duì)組合：呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）標(biāo)記膠體金（噴在釋放墊上）+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）劃膜；
2.1.2 呼吸道（RSV）合胞病毒抗原（貨號(hào)：EKY0217B）用合適的稀釋液依次稀釋到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL。
2.1.3反應(yīng)模式：10uL樣品+90uL稀釋液混勻，取80uL混合液上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；
2.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在膠體金免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合測(cè)試呼吸道（RSV）合胞病毒抗原稀釋梯度均顯色，測(cè)試三例陰性樣品均不顯色，靈敏度可達(dá)5ng/mL，表明此抗體配對(duì)在膠體金層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。
膠體金層析平臺(tái)測(cè)試示意圖
2.2彩色乳膠免疫層析平臺(tái)：
2.2.1抗體配對(duì)組合：呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）標(biāo)記彩色乳膠（噴在釋放墊上）+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）劃膜劃膜；
2.2.2 呼吸道（RSV）合胞病毒抗原（貨號(hào)：EKY0217B）用合適的稀釋液依次稀釋到1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。
2.2.3反應(yīng)模式：10uL樣品+90uL稀釋液混勻，取80uL混合液上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；
2.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在彩色乳膠免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合測(cè)試呼吸道（RSV）合胞病毒抗原稀釋梯度均顯色，測(cè)試三例陰性樣品均不顯色，靈敏度可達(dá)0.2ng/mL，表明此抗體配對(duì)在彩色乳膠免疫層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。
彩色乳膠層析平臺(tái)測(cè)試示意圖
3.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 推薦配對(duì) |
人呼吸道合胞病毒（RSV）抗體 | EKY0828A | 呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）標(biāo)記膠體金+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）劃膜（膠體金層析配對(duì)組合） 呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）標(biāo)記彩色乳膠+呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）劃膜（彩色乳膠層析配對(duì)組合） |
人呼吸道合胞病毒（RSV）抗體 | EKY0828B | |
呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828A）-膠體金濃縮液 | DKY1325A | |
呼吸道合胞病毒（RSV）抗體（貨號(hào)：EKY0828B）-彩色乳膠濃縮液 | DKY1325B | |
膠體金（40nm，1OD） | DXJ9917B-100ml | |
紅色羧基乳膠微球，400nm | DEG0809A-10ml | |
呼吸道（RSV）合胞病毒抗原 | EKY0217B |
