摘自《體檢人群幽門螺桿菌血清學檢測專家共識》

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, Hp)是一種革蘭氏陰性桿菌，是危害人類健康常見的病原體之一。1994年，世界衛生組織(WHO)將Hp定義為Ⅰ類致癌因子。2021年，美國公共衛生機構將Hp列為新增的致癌物，進一步引起我國公眾對Hp感染的重視，隨之增加了在健康體檢中檢測Hp的意向。此外，Hp感染還與慢性胃炎、消化性潰瘍、黏膜相關淋巴組織(mucosaassociated lymphoid tissue, MALT)淋巴瘤等疾病的發生密切相關。我國人群的Hp感染率仍然維持高位(～50%)，多數感染者并無明顯消化道癥狀或相關并發癥，類似"健康帶菌狀態"，實際上感染者的胃黏膜可能已經發生慢性炎癥，甚至出現萎縮、腸化等癌前狀態。

按照我國新版的《第六次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告》，對于Hp的診斷方法推薦尿素呼氣試驗、單克隆糞便抗原試驗和血清學檢測方法。國際Hp馬斯特里赫特Ⅳ共識亦指出，血清學檢測方法是唯一一個不受胃內細菌定植狀況影響的檢測方法，尤其在胃內Hp細菌數量少的時候，其他檢測方法會出現假陰性，而血液中針對Hp抗原、特別是CagA等特異性抗原的抗體水平相對穩定，不受感染程度和治療的影響，更易于檢測。

Hp馬斯特里赫特Ⅴ共識亦強調，經過當地驗證高度準確的血清學試驗可用于非侵入性Hp感染診斷。Hp的CagA和VacA蛋白是重要致病因子，檢測血清抗CagA、VacA抗體，可以評價Hp菌株的毒力水平。

Hp血清學檢測具有操作簡單、適用范圍廣、成本效益高等優勢，常用于Hp流行病學調查研究。隨著人們對Hp認識的不斷深入，Hp毒力分型檢測已被廣泛應用于體檢人群，尤其是處于胃癌高發地區、有胃癌家族史及40歲以上的體檢人群。通過對Hp分型檢測，有助于判定感染Hp的不同毒力水平，在體檢人群中發現CagA和VacA陽性Hp感染的高風險人群意義重大，可以促進對于該類人群Hp感染的早診早治，進而降低Hp相關消化道疾病特別是胃癌的發生率。

Hp毒力因子CagA和VacA抗體檢測 Hp致病基于其可以產生多種毒力因子，隨著Hp致病機理研究的進展，新的毒力因子不斷被發現。大量的研究結果表明，在目前眾多Hp的毒力因子中，CagA和VacA具臨床指導意義。《中國幽門螺桿菌根除與胃癌防控的專家共識意見》指出，CagA和VacA是Hp重要的毒力因子。根據是否表達CagA和(或)VacA這兩種毒力因子可將Hp分為Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型Hp菌株CagA和/或VacA蛋白表達陽性，為致病性較強的產細胞毒素菌株，Ⅱ型Hp菌株CagA和VacA蛋白均不表達，為不產生主要毒力因子的菌株。

鑒于Hp的UreA(尿素酶 A)、UreB(尿素酶B)、CagA和VacA蛋白等Hp結構成分或毒力蛋白，被Hp分泌產生后可以刺激機體免疫系統產生相應的血清抗體，借助血清Hp相關抗體可以反映受檢者的Hp感染情況，從而實現對Hp的毒力分型。

西寶生物開發的高質量幽門螺旋桿菌(CagA)重組抗原，可應用于體外診斷幽門螺桿菌抗體IgG/IgM檢測試劑盒開發，適用于化學發光等多種應用場景，助力腸道研究防控無"幽"。

針對細胞毒素相關蛋白A(CagA)的檢測，西寶生物推出1種CagA抗原及鼠抗人IgG單抗。具體配對方式如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行更為詳細的驗證）。

2.2化學發光（AP）平臺-雙抗原夾心法

選取NMPA獲證試劑為參考系統。對西寶生物（AE）與參考系統的CagA測值結果分別根據其參考值（西寶生物（AE）：COI≥1為陽性，COI＜1為陰性；參考系統：≥6為陽性，＜6為陰性）進行陰陽性判定，并對判定結果進行四格表分析，結果如下：

靈敏度：24/29×100%=82.8%

特異性：47/50×100%=94%

符合率：（24+47）/79×100%=91.1%

圖1為AE平臺檢測臨床樣本發光值分布，CagA陰性組發光值均值與CagA陽性組發光值均值能夠明顯區分。由表1數據可得，3例假陽性樣本及5例假陰樣本均落在參考系統的cutoff附近，屬于灰區，需要用第三方試劑進行確認。西寶生物AE組合與參考系統的靈敏度大于80%，特異性及符合率大于90%，說明兩種試劑的臨床符合率較高。

選取NMPA獲證試劑為參考系統。對西寶生物（AP）與參考系統的CagA測值結果分別根據其參考值（西寶生物（AP）：COI≥1為陽性，COI＜1為陰性；參考系統：≥6為陽性，＜6為陰性）進行陰陽性判定，并對判定結果進行四格表分析，結果如下：

靈敏度：25/29×100%=86.2%

特異性：47/50×100%=94%

符合率：（25+47）/79×100%=91.1%

圖2為AP平臺檢測臨床樣本發光值分布，CagA陰性組發光值均值與CagA陽性組發光值均值能夠明顯區分。由表2數據可得，3例假陽性樣本及4例假陰樣本均落在參考系統的cutoff附近，屬于灰區，需要用第三方試劑進行確認。西寶生物AP組合與參考系統的靈敏度大于85%，特異性及符合率大于90%，說明兩種試劑的臨床符合率較高。

樣本:樣品加樣量10ul；

試劑1：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：鼠抗人IgG單抗（貨號：EKN0255B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：10ul樣本+50ul試劑1混合，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育5min，清洗；

第二步：加入預激發液及激發液，進行測試。

樣本:樣品加樣量10ul；

試劑1：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；

試劑2：HP CagA抗原（貨號：EDD0033C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；

反應條件：

第一步：10u樣本+50ul試劑1+50ul試劑2+混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，進行測試。

西寶生物研發團隊還篩選出優質的配對抗體為幽門螺桿菌抗原檢測試劑盒開發者保駕護航。